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Rev Cubana Angiol y Cir Vasc 2000;1(1):38-41
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Modelo isquemia reperfusión en miembros inferiores de ratas

Dra. María Antonia Alfonso Valiente,1 Lic. Rafael Simón Carballo,2 Lic. Ana María Quintela Pérez2 y Dra. Mercedes Martínez Rabraza3

RESUMEN

El daño por reperfusión trae como consecuencia la muerte celular y la disfunción endotelial causada por la restauración del tejido sanguíneo. El propósito del presente trabajo ha sido la obtención de un modelo isquemia reperfusión en miembros inferiores de ratas. Fueron sujetos a estudio 40 ratas machos Wistar divididas en 4 grupos de 10 animales cada uno que se someten a diferentes períodos de isquemia reperfusión correspondiente a 30, 60, 120, min. y un grupo control. Se realizó la determinación de peróxidos lipídicos donde se observó que los niveles de éstos a los 30 min de isquemia reperfusion fueron muy similares al grupo control, en tanto se encontró diferencias significativas en los grupos con período de isquemia reperfusión de 60 y 120 min. El estudio histológico de arteria femoral y músculo estriado se observó una mayor congestión vascular, hemorragias moderadas en el grupo 3, sometidos a 120 min, de reperfusión. Además se apreció estrías ondulantes en el músculo.

Descriptores DeCS: TRAUMATISMO POR REPERFUSIÓN/ complicaciones; MUERTE CELULAR; RATAS.

El daño por reperfusión puede traer como consecuencia la muerte celular a causa de la disfunción causada por la restauración del flujo sanguíneo al tejido isquémico.

Esto puede ser diferente del proceso reparativo al tejido que sigue al insulto isquémico, 4 tipos de daño por reperfusión se han descrito en la literatura: daño letal por reperfusión, daño no letal por reperfusión, reperfusión por arritmia y daño vascular (incluye el fenómeno de no reflujo).

Los radicales libres median en los procesos de la peroxidación lipídica y éstos han sido implicados en la patogenia del daño producido en el proceso de isquemia reperfusión.1-4

Los 3 componentes que se han propuesto como mediadores del daño por reperfusión son los radicales libres de oxígeno, el sistema complemento y los neutrófilos.

En el presente trabajo nos propusimos reproducir un modelo de isquemia reperfusión en miembros inferiores de ratas, evaluando su efecto mediante pruebas bioquímicas y estudios histopatológicos.

MÉTODOS

Se emplearon 40 ratas machos Wistar clínicamente sanas procedentes del Centro Nacional para Animales de Laboratorio (CENPALAB) con un peso promedio de 150 g las cuales fueron ubicadas en jaulas individuales y alimentadas en horas de la mañana con 25 g de pienso normal. Los animales fueron divididos aleatoriamente en 4 grupos de 10 ratas cada uno.

El tiempo de isquemia reperfusión a que fueron sometidos los animales de cada uno de los grupos se muestran en la tabla 1.

TABLA 1. Período de isquemia y reperfusión a que fueron sometidos los animales de los diferentes grupos

  Tiempo isquemia  Tiempo reperfusión
  (min)  (min)
Grupo 1 120 30
Grupo 2 120 60
Grupo 3 120 120

Modelo isquemia

Al comenzar el experimento se pesa al animal y se anestesia intrape-ritonealmente con cloropromacina (1 mg/kg de peso) y ketamina (10 mg/kg de peso). La isquemia se produce al ajustar a la extremidad izquierda de la rata un segmento de madera de (50 x 2,5 mm) enrrollándolo con un goma elástica (90 x 20x 1mm) dando 6 vueltas hasta fijar la misma, produciéndose el torniquete que da lugar a la isquemia. Una vez concluido el tiempo de isquemia fue eliminado el torniquete y se le extrajo 2 mL de sangre de la vena cava para determinar los niveles de peróxidos lípidicos.5 Se realizó el estudio histológico de la arteria femoral y el músculo estriado de la extremidad afectada,6 según las lesiones observadas en el microscopio se clasificaron en: leve, moderada y severa.

RESULTADOS

La congestión vascular en arteria femoral (tabla 2) se presentó en los tres grupos analizados; en el grupo 1, el 90 % resultó ligera y el 10 % moderado; al analizar el grupo 2, el 60 % fue ligera y el 40 % moderada; el grupo 3 fue el más significativo clasificándose de moderado el 60 % y el resto severo.

TABLA 2. Congestión vascular en arteria femoral

 
Ligera
Moderada
Severa
Grupos 
(%)
(%)
(%)
1
9(90)
1(10)
-
2
6(60)
4(40)
-
3
-
6(60)
4(40)
4
1(10)
-
-

En los resultados observados al realizar el estudio histológico de los fragmentos de músculo estriado sometido a la isquemia predominaron las hemorragias intersticiales (tabla 3) apreciándose en el grupo 2 una afectación ligera en el 60 % de los casos y en el grupo 3 el 70 % resultó ser moderada.

TABLA 3. Hemorragias intersticiales en el músculo estriado

Grupos
Ligera
Moderada
Severa
 
(%)
(%)
(%)
1
3(30)
-
-
2
6(60)
-
-
3
3(30)
7(70)
-
4
-
-
-

Un signo histológico indirecto de isquemia es la presencia de estrías ondulantes en el citoplasma de las fibras musculares estriadas (tabla 4) y en éstas se observan afectación leve en el 50 % de las muestras pertenecientes al grupo 3.

TABLA 4. Estrías ondulantes en músculo estriado

Grupos 
Ligera (%)
Moderada
Severa
1
-
-
-
2
1(10)
-
-
3
5(50)
 
-
4
-
-
-

Según nuestro análisis estadístico (Test de Student) se puede apreciar en la tabla 5 que los niveles de peróxidos lipídicos fueron significativamente superiores en los animales con un período de isquemia de 60 y 120 min.

TABLA 5. Valores de peróxidos lipídicos de los animales estudiados (mmol/L)

Tiempo de isquemia-reperfusión (min)      
30
60
120
Control
2,5070
3,3690*
3,3520*
1,4520
* DS p < 0,05

 DISCUSIÓN

Estudios realizados por Birbaum1 refieren que existen daños severos en las zonas que han sido afectadas por isquemia reperfusión y se pueden encontrar congestión en el lugar lesionado. Nuestro resultado coincidió con lo planteado por el autor pues en nuestra investigación se puso de manifiesto la presencia de congestión vascular en la arteria femoral y es más evidente a medida que aumenta el tiempo de isquemia reperfusión.

Con respecto a los fragmentos de músculos estriados nuestros resultados arrojaron hemorragias intersticiales; se observó mayor tanto por ciento de afectación en el grupo 3, con un 70 % de incidencia moderada, resultados que concuerdan con lo planteado por Ferrari4 y Lefer,7 los cuales citan que el músculo estriado es una de las zonas más afectadas con lesiones muy parecidas a las observadas por nosotros.

Las estrías ondulantes en músculo estriado observadas en el trabajo son similares a las encontradas anteriormente por otros autores.8,9

Algunos autores plantean que los peróxidos lipídicos actúan sobre el mecanismo de isquemia reperfusión10-12 esto se evidenció en nuestro trabajo pues a partir de los 60 min de isquemia reperfusión se observó un aumento en los valores de peróxidos lipídicos con respecto al control.

CONCLUSIONES

SUMMARY

Damage caused by reperfusion results in cell death and endothelial dysfunction caused by restoration of blood tissues. The purpose of this paper is to obtain an ischemia-reperfusion model in lower limbs of rats. Forty Wistar male rats were included in a study and divided into 4 groups of 10 animales each, subjected to different periods of ischemia-reperfusion of 30, 60 and 120 minutes and a control group.Determination of lipid peroxides was carried out where it was observed that their levels at 30 minutes of ischemia-reperfussion were very comparable to those of the control group whereas significant differences were found in the groups with ischemia-reperfussion at 60 and 120 minutes. The histologic study of the femoral artery and striated muscle revealed a higher vascular congestion and mild hemorrhages in the third group subjected to 120m reperfusion. Also ondulating strias were observed in the muscle.

Subject headings: REPERFUSION INJURY/complications; CELL DEATH; RATS.
 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Recibido: 27 de diciembre de 1999. Aprobado: 10 de enero del 2000.
Dra. María Antonia Alfonso Valiente. Instituto Nacional de Angiología y Cirugía Vascular (INACV), MINSAP. Calzada del Cerro No. 1551, esq. Domínguez, Cerro, Ciudad de La Habana, Cuba, CP12000. Teléf. 57 6493.e-mail: experim@infomed.sld.cu
 
 

1 Médico Veterinario.
2 Investigador Auxiliar.
3 Especialista de I Grado Anatomía Patológica.
 
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