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Instituto Nacional de Endocrinología
Anticuerpos antiespermatozoides en parejas con infertilidad de causa no
explicada
Dra. Sanda Yepe Oliveros,1 Dr. Lorenzo Mallea
Sánchez,2 Lic. Maydelín Frontela Noda3
y Dra. Ada Julia Machado Curbelo4
RESUMEN
Se estudió una muestra de 75 parejas infértiles en relación
con la presencia de anticuerpos antiespermatozoides en plasma seminal,
moco cervical o adheridos a los espermatozoides, mediante la prueba de
inmunobeads
y se determinó la capacidad inhibidora del plasma seminal sobre
la proliferación linfocitaria, para evaluar la capacidad inmunomoduladora
del semen como participante en el mecanismo patogénico primario
de aparición de los anticuerpos antiespermatozoides. Se organizaron
las parejas en 2 grupos, según la presencia o no de anticuerpos
antiespermatozoides y se compararon en cuanto a la frecuencia de embarazo
y la capacidad inmunosupresora del plasma seminal. Además se comparó
la incidencia de embarazo en grupos de parejas con capacidad inmunosupresora
y sin ella. Se observó que la presencia de anticuerpos antiespermatozoides
fue menos frecuente que la reportada por otros autores y no estuvo relacionada
con la capacidad inmunosupresora del plasma seminal, tampoco influyeron
sobre la frecuencia de embarazo la presencia de anticuerpos antiespermatozoides
y la capacidad inmunosupresora del plasma seminal.
Descriptores DeCS: AUTOANTICUERPOS/análisis; ESPERMATOZOIDE/inmunología;
INFERTILIDAD/inmunología.
Existen muchas parejas infértiles en las que no es posible encontrar
el factor causal de la infertilidad y que por tanto, su afección
es clasificada como infertilidad de la pareja de causa desconocida. En
ellas se ha encontrado con frecuencia la presencia de anticuerpos antiespermatozoides
ya sean adheridos a estas células, en el plasma seminal, o en el
moco cervical.1-3 Algunos resultados de investigaciones indican
que infecciones seminales, ginecológicas, varicocele, torsión
testicular y procedimientos quirúrgicos como la vasectomía,
pueden constituir algunos factores de riesgo para el desarrollo de anticuerpos
antiespermatozoides.4-6 En el momento actual existen estudios,
algunos extensos, que prueban la capacidad inmunomoduladora del plasma
seminal, donde se reconocen sustancias que tienen un efecto inmunosupresor,
como es el caso de la prostaglandina E y de algunas glicoproteínas,
que actúan suprimiendo los mecanismos inmunes que pudieran, en determinado
momento, reaccionar contra los espermatozoides.7
Por todo esto es lógico pensar que en la formación de
los anticuerpos anties-permatozoides, tanto en el hombre como en la mujer,
pudiera actuar como mecanismo patogénico primario un trastorno del
mecanismo inmunomodulador del semen, lo que facilitaría el desarrollo
y la acción de estos anticuerpos, los cuales actuarían inhibiendo
las capacidades funcionales del espermatozoide.
En este trabajo nos propusimos determinar la influencia de la capacidad
inmunosupresora del plasma seminal y la presencia de anticuerpos antiespermatozoides
sobre la frecuencia de embarazo en parejas con infertilidad de causa no
explicada.
MÉTODOS
Selección de la muestra
Estudiamos 75 parejas con infertilidad de causa no explicada (hombres con
semen normal y mujeres con ovulación normal y con trompas permeables)
Incluimos aquellas parejas en que se encontró una prueba poscoital
anormal. Todas se reclutaron en la Consulta de Infertilidad del Instituto
Nacional de Endocrinología.
Hicimos el estudio en la forma habitual y determinamos además
la presencia de anticuerpos antiespermatozoides de clase IgG e IgA adheridos
a los espermatozoides, en el plasma seminal y en moco cervical y la capacidad
inmunosupresora del plasma seminal. Indicamos el tratamiento habitual,
según las normas vigentes.
Detección de anticuerpos antiespermatozoides
Detectamos anticuerpos antiespermatozoides mediante la prueba de immunobeads
(IBT).8-11 Los immunobeads (IB) son microesferas de poliacrilamida
con inmunoglobulinas de conejo antihumanas convalentemente unidas. La presencia
de IgG e IgA puede ser determinada con esta prueba.
Realizamos el IBT de forma directa para determinar anticuerpos antiespermatozoides
adheridos a dichas células, y de forma indirecta, para anticuerpos
antiespermatozoides en el moco cervical y en el plasma seminal.
Test de immunobeads directo
Tomamos las muestras problema y lavamos los espermatozoides 2 veces con
HAM F-10 más BSA al 3 %, 10 mL (centrifugación a 1 900 rpm
durante 5 min a temperatura ambiente). Al final, ajustamos la concentración
celular a 10-20 X 106 espermatozoides/mL.
En una lámina de cristal añadimos 10 m
L de esa suspensión, los espermatozoides ajustados y 10 m
L de IB(anti-IgA o anti-IgG). Incubamos 10 min a temperatura ambiente en
cámara húmeda. Contamos en microscopio de contraste de fase
los espermatozoides móviles. Y consideramos espermatozoides positivos
si tenían 2 o más IB pegados a la superficie. El caso positivo
fue aquél que tuvo 5 % o más de espermatozoides positivos.
Test de immunobeads indirecto
Para obtener plasma seminal, tomamos las muestras problema y las centrifugamos
a 1 300 rpm durante 5 min a temperatura ambiente. Y para obtener el moco
cervical, primero licuamos con bromelina y luego homogeneizamos mecánicamente.
Centrifugamos igual que el plasma seminal y luego incubamos el sobrenadante
a 56 °C para inactivar el complemento.
Añadimos el moco cervical o plasma seminal previamente separados
y diluidos 1:2 con HAM F-10 más BSA 3 % a un pellet de espermatozoides
lavados 2 veces y negativo al IBT directo a una concentración 10-20
x 106 espermatozoides móviles/mL. Resuspendimos bien
e incubamos 60 min a 37 °C. Luego
lavamos los espermatozoides 2 veces con HAM F-10 más BSA 3 % (centrifugación
a 1 900 rpm durante 5 min a temperatura ambiente). Ajustamos los espermatozoides,
preparamos la lámina y luego contamos y evaluamos igual que para
el IBT directo.
Estudio de la capacidad inmunosupresora del plasma seminal
Determinamos la capacidad inmunosupresora del plasma seminal de todos los
hombres incluidos en el estudio mediante un ensayo de inhibición
de la proliferación linfocitaria in vitro.9
Frecuencia de embarazo
Obtuvimos este dato mediante la revisión de las historias clínicas
y la correspondencia.
Análisis estadístico
Organizamos las parejas en 2 grupos según la presencia o no de anticuerpos
antiespermatozoides e incidencia de embarazo, en grupos de parejas con
capacidad immuosupresora y sin ella, mediante la misma prueba.
RESULTADOS
Hubo gran variabilidad de la capacidad inhibidora del plasma seminal sobre
la proliferación de los linfocitos, encontramos valores desde 0
hasta 100 %. En un trabajo anterior realizado en nuestro laboratorio se
determinaron valores para considerar las muestras de plasma seminal como
inhibidoras o no inhibidoras a partir del estudio del efecto de un pool
de fluido seminal sobre la proliferación linfocitaria inducida por
PHA, y se consideraron como inhibidoras aquellas muestras en las que la
inhibición fue £ 15 % y como no
inhibidoras, las que estuvieron por debajo de ese valor.12 Basándose
en este criterio clasificamos a nuestras pacientes.
Detectamos anticuerpos antiesper-matozoides en 4 de las 75 parejas estudiadas,
al comparar grupos de parejas con causa inmunológica de infertilidad
(tabla 1). En cuanto a los resultados de la prueba poscoital, observamos
que en el 100 % de las parejas con infertilidad de causa inmunológica
fue anormal, y en el 69 % de las parejas con infertilidad de causa no inmunológica.
No obstante, al ser comparados ambos grupos mediante la prueba de probabilidad
exacta de Fisher, no hubo diferencias significativas entre ellos (tabla
2).
TABLA 1. Pacientes con pruebas de IBT positivas
|
Anticuerpos
|
|
|
| Casos con IBT |
asociados a espermatozoides
|
Anticuerpos
en el plasma seminal
|
Anticuerpos
en el moco cervical
|
| positivos |
%
|
%
|
%
|
| 1 |
IgG-100
|
IgG-50
|
-
|
| |
IgA-70
|
IgA-16
|
|
| 2 |
IgG-35
|
IgG-25
|
-
|
| |
IgA-10
|
IgA-7
|
|
| 3 |
-
|
-
|
IgG-90
|
| |
|
|
IgA-90
|
| 4 |
-
|
-
|
IgG-80
|
| |
|
|
IgA-45
|
TABLA 2. Comparación entre grupos de parejas de infertilidad
de causa inmunológica y sin ella en cuanto a los resultados de la
prueba poscoital (TPC)
| |
Infertilidad
|
Infertilidad
|
| |
no inmunológica
|
inmunológica
|
| TPC normal |
23
|
0
|
| TPC anormal |
48
|
4
|
p = 0,3057.
Entre los grupos de causa inmunológica de infertilidad y sin
ella no hubo diferencias significativas en cuanto a frecuencia de embarazo,
sólo 1 pareja con anticuerpos antiespermatozoides en moco cervical
logró la concepción (tabla 3).
TABLA 3. Comparación entre grupos de parejas con infertilidad
de causa inmunológica y sin ella en cuanto a frecuencia de embarazo
| |
Infertilidad
|
Infertilidad
|
| |
no inmunológica
|
inmunológica
|
| No embarazo |
63
|
3
|
| Embarazo |
8
|
1
|
p=0,407.
En relación con la capacidad inmunosupresora del plasma seminal,
tampoco hubo diferencias significativas entre ambos grupos (tabla 4). El
grupo de parejas inhibidoras tuvo una frecuencia de embarazo similar a
las no inhibidoras y estadísticamente se comprobó no haber
diferencias significativas (tabla 5).
TABLA 4. Comparación entre grupos de parejas de infertilidad
de causa inmunológica y sin ella en cuanto a la capacidad inmunosupresora
del plasma seminal
| |
Infertilidad no
|
Infertilidad
|
| |
inmunológica
|
inmunológica
|
| No inhibidoras |
22
|
1
|
| Inhibidoras |
49
|
3
|
p=0,64.
TABLA 5. Comparación entre los grupos de parejas inhibidoras
y no inhibidoras de la proliferación linfocitaria relativa a la
frecuencia de embarazo
| |
No inhibidoras
|
Inhibidoras
|
| No embarazo |
20
|
46
|
| Embarazo |
3
|
6
|
p=1,00.
DISCUSIÓN
En trabajos anteriores se señala que la frecuencia de infertilidad
de la pareja dependiente de anticuerpos antiespermatozoides es de aproximadamente
10 a 15 %, mientras que otros trabajos alcanzan el 21 %.3,13
Una probable explicación de que hayamos encontrado una frecuencia
menor de anticuerpos antiespermatozoides que otros autores es la frecuencia
de infecciones seminales en la población estudiada. En los casos
de los resultados de los autores anteriormente citados es de notar que
las características sociodemográficas de las poblaciones
por ellos estudiadas, así como sus intereses de investigaciones,
hacen que en esas poblaciones se observe una frecuencia relativamente alta
de infecciones seminales, lo que se sabe que es un factor predisponente
para la aparición de anticuerpos antiespermatozoides.3,5,8
Por otra parte, diferencias entre los resultados de pruebas utilizadas
para detectar anticuerpos antiespermatozoides, como reacción de
antiglobulinas mixta (prueba MAR), Elisa, IBT, han sido confirmadas por
algunos autores,1,8,9,11,14 lo que ha sido controvertido desde
hace algún tiempo. Estos métodos detectan diferentes tipos
de anticuerpos y no hay ninguno de validez universal. Por lo tanto, consideramos
que los resultados aquí obtenidos mediante IBT no son absolutos
y que pudieran existir parejas donde aun estando presentes los anticuerpos
antiespermatozoides, no se hayan detectado. En un estudio anterior hecho
en nuestro laboratorio (no publicado), en el cual se utilizó la
prueba MAR, se encontró una frecuencia de positividad aún
más baja.
Algunos investigadores plantean que los anticuerpos formados, tanto
en el hombre como en la mujer, contra antígenos de la superficie
espermática pudieran impedir la fertilidad por interferencia con
la penetración en moco cervical, presumiblemente por entrecruzamiento
del espermatozoide con componentes de alta viscosidad del moco cervical.15
Estos investigadores reportaron alto porcentaje de mujeres con anticuerpos
antiespermatozoides en moco cervical cuando la prueba poscoital fue anormal.
Otros tienen resultados discrepantes donde pocas de las parejas con prueba
poscoital anormal presentan anticuerpos antiespermatozoides.16
En nuestro estudio, la comparación de grupos de infertilidad de
causa inmunológica no inmunológica sugiere la no asociación
entre la anormalidad de la prueba poscoital y la presencia de anticuerpos
antiespermatozoides, pero realmente la baja tasa de pacientes con infertilidad
de causa inmunológica no nos permite realizar comparación
adecuada entre ambas variables.
El fallo para demostrar baja frecuencia de embarazo en pacientes con
anticuerpos antiespermatozoides, como han reportado algunos autores, sugeriría
que la infertilidad no puede ser explicada por la presencia de dichos anticuerpos.
Pero el pequeño número de pacientes con anticuerpos antiespermatozoides
impide el análisis comparativo adecuado entre ambos grupos en cuanto
a la frecuencia de embarazo.
A pesar de que no hallamos relación entre la capacidad inmunosupresora
del plasma seminal y la aparición de anticuerpos antiespermatozoides
no se puede afirmar que este factor no deba ser tomado en cuenta al tratar
de explicar los mecanismos causales de la infertilidad ya que la muestra
obtenida de pacientes con infertilidad de causa inmunológica no
fue lo suficiente para establecer dicha asociación. Por otra parte,
la no diferencia significativa en cuanto a la frecuencia de embarazo en
grupos de inhibidores y no inhibidores sugiere que la capacidad inmunosupresora
no es un predictor de infertilidad, a menos que el bajo número de
concepciones logradas en ambos grupos pudiera esconder dicha asociación.
Pero una conclusión de este tipo sería inconsistente pues
por lo novedoso del estudio de la capacidad inmunosupresora, la definición
de normalidad y anormalidad es arbitraria. Como explicamos previamente,
este criterio lo obtuvimos a partir del cálculo de la media y la
desviación estándar de un pool de plasma seminal de
pacientes supuestamente normales. Sería conveniente definirlo en
una muestra de hombres con fertilidad probada. Debemos tener en cuenta
por lo tanto, que los factores inmunosupresores del plasma seminal pudieran
actuar no sólo inhibiendo la producción de anticuerpos antiespermatozoides
(cosa que en este caso no ha podido demostrarse), sino también inhibiendo
la producción de citoquinas por las células inmunocompetentes
que, se sabe, están presentes en el aparato genital femenino17
y son capaces de afectar la capacidad fertilizante de semen. Además,
también hay que considerar que elementos inmunomoduladores del plasma
seminal pueden ser estimulantes de la respuesta inflamatoria y desempeñar
una importante función en la infertilidad masculina.18
De todo lo discutido con anterioridad podemos concluir que, según
los resultados obtenidos en nuestro estudio, los factores inmunológicos
no parecen ser una causa importante dentro de la patogenia de la infertilidad
de causa no explicada.
SUMMARY
A sample of 75 infertile couples was studied in relation to the presence
of antisperm antibodies in seminal plasma, cervical mucus or adhered to
spermatozoids by the test of immunobeads. The inhibitory capacity of seminal
plasma on lymphocyte proliferation was determined to evaluate the immunomodulatory
capacity of semen as an actor in the primary pathogenic mechanism of appearance
of antisperm antibodies. Couples were organized in 2 groups, according
to the presence or not of antisperm antibodies. The frequency of pregnancy
and the immunosuppressive capacity of seminal plasma were compared. The
incidence of pregnancy in groups of couples with and without imunosuppressive
capacity was also compared. It was observed that the presence of antisperm
antibodies was less frequent than the reported by other authors and that
it was not related to the immunosuppressive capacity of seminal plasma.
The presence of antisperm antibodies and the immunosuppressive capacity
of seminal plasma did not influence on the frequency of pregnancy.
Subject headings: AUTOANTIBODIES/analysis; SPERMATOZOA/immunology;
INFERTILITY/immunology.
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Recibido: 16 de noviembre de 1999. Aprobado: 10 de febrero de 2000.
Dra. Sanda Yepe Oliveros. Instituto Nacional de Endocrinología,
Zapata y D, El Vedado, Ciudad de La Habana, Cuba. CP 10400.
1 Especialista de I Grado en Inmunología.
2 Especialista de I Grado en Inmunología. Investigador
Agregado.
3 Licenciada en Bioquímica. Aspirante a Investigadora.
4 Especialista de II Grado en Bioquímica Clínica.
Investigadora.