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Rev Cub Farm 2004; (Supl Esp)

Farmacología y Farmacocinética

Evaluación del efecto del factor de crecimiento epidérmico humano recombinante en formulaciones semisólidas

Ana Aguilera Barreto, Jorge Ducongé, Carmen Valenzuela y Suzette Alfonso

Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, Ave 31; e/ 158 y 190; Cubanacán, Playa. Ciudad de La Habana, Cuba. E-mail: ana.aguilera@cigb.edu.cu

La piel es el tegumento externo del cuerpo humano el mismo cumple importantes funciones en el organismo como la de protegerlo, por lo que se hace necesaria su rápida reparación. En el centro de Ingeniería Genética y Biotecnología (CIGB) se desarrollan formulaciones semisólidas que contienen factor de crecimiento epidérmico humano recombinante debido a su efecto mitogénico lo que permite entre otros factores un efecto de regeneración epitelial. En este trabajo se evaluó el efecto de diferentes formulaciones semisólidas desde el punto de vista planimétrico en heridas abiertas de ratas. Los grupos experimentales fueron A, B y C placebo, 10 y 20 µg/g tratado con base emulsionada agua en aceite, D- tratado con Hebermin, E no tratado. Las formulaciones se aplicaron una vez al día durante 6 días, al séptimo día se sacrificaron las ratas y se midieron las áreas repitelizadas comparando las áreas iniciales con las finales. De acuerdo a dicho análisis se observó que en el grupo B se observaron las mejores potencialidades terapéuticas con más de un 65 % de las lesiones reepitelizadas en más de un 90% de su área inicial. Por lo que se corrobora el efecto mitogénico del Factor de Crecimiento Epidérmico en la piel.

 

Análisis diferencial de las potencialidades de promoción de absorción de una familia de 1-O-alquil gliceroles

Miguel Bilbao Díaz, Yadira Peña Proenza, Miguel Angel Cabrera Pérez y Jorge Ducongé Soler

Departamento de Farmacología y Toxicología. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana.
Centro de Bioactivos Químicos. Universidad Central de Las Villas.


Varios procedimientos han sido recientemente propuestos para reducir la estructura molecular a un limitado número de relevante índices topológicos, basados en la teoría “matriz- gráfico” del análisis de la relación estructura-actividad de compuestos. La interrelación entre estas propiedades y la biodisponibilidad de una familia de 1-O-alquil gliceroles son discutidas, utilizándose como compuestos de referencia moléculas que presentan una analogía estructuralfuncional, y que han sido reconocidos como agentes promotores de absorción de clase I. Este enfoque de tamizaje in sílico asistido por computadora nos permitió postular que los 1-O-alquil gliceroles, en particular el 1-O-Hexadecil glicerol y 1-O-Octadecil glicerol, son excelentes candidatos para demostrar su elevada capacidad promotora en estudios in vivo, alcanzando altos niveles porcentuales de biodisponibilidad (>90%), utilizando el enfoque TOPSMODE (ModesLab). Se concluye, según análisis por discriminante, que todos los miembros de la familia presentaron excelentes potencialidades para la absorción gastrointestinal.

 

De la estructura molecular a la farmacocinética del medicamento. Nuevas aproximaciones computacionales

Miguel Angel Cabrera Pérez y Yovani Marrero Ponce

Centro de Biactivos Químicos. Universidad Central "Marta Abreu" de Las Villas. Email: macabrera@cbq.uclv.edu.cu

En el presente trabajo se hace una descripción del estado del arte de los métodos computacionales utilizados en la predicción de propiedades farmacocinéticas, desde los métodos basados en reglas o propiedades físico-químicas hasta la utilización de los más novedosos descriptores moleculares. Se hace un análisis de nuevos métodos topológicos desarrollados por el grupo de Diseño Racional de Fármacos del Centro de Biaoctivos Químicos así como su aplicación en la predicción de propiedades farmacocinéticas como la Absorción Intestinal en Humanos, la absorción en células Caco-2 y el coeficiente de partición sangre-cerebro. Finalmente, se realiza un análisis de las nuevas tendencias en la modelación molecular de las propiedades ADME.

 

Evaluación preclínica de la vainilla como inhibidor de la polimerización de la hemoglobina S

Grisel Del Toro García, Yoagne M. Trapero Quintana, José E. Falcón Dieguez, Yamirka Alonso Geli, Axel Mancebo, Yana González, Marta García, Yamisleidys Alonso, Yolanda C. Valdés Rodríguez y Carlos A. Cabal Mirabal

Departamento de Biofísica, Centro de Biofísica Médica, Universidad de Oriente. Patricio Lumumba s/n, 90500, Santiago de Cuba, Cuba.
Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio (CENPALAB).
Laboratorio Farmacéutico Oriente.
Centro de Estudio para las Investigaciones y Evaluaciones Biológicas, Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de la Habana.

La polimerización de la desoxihemoglobina S, caracterizada por el tiempo de demora, constituye el evento fisiopatológico primario de la hemoglobinopatía SS para la cual aún no existe un tratamiento efectivo. Entre los compuestos que inhiben la polimerización y la falciformación de los hematíes se encuentra el aditivo alimenticio vainillina (4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído) con una actividad moderada. Se evaluó in vitro, a las razones molares (hemoglobina:vainillina) 1:4, 1:5, 1:6, 1:7 y 1:8, su efecto sobre el tiempo de demora utilizando la Resonancia Magnética Nuclear Protónica (RMN-1H). Para precisar la ausencia de actividad citotóxica sobre los hematíes SS se evaluó el efecto de las razones molares 1:1, 1:2, 1:4, 1:5, 1:8 y 1:10 sobre la liberación de hemoglobina. Se evaluó a corto plazo (14 días) el efecto de la administración de vainillina en ratas y conejos. La vainillina incrementó el tiempo de demora y su porcentaje de variación fue 17%±8% (1:4), 21%±15% (1:5), 28%±14% (1:6), 23%±10% (1:7) y 35%±26% (1:8), observándose un efecto dosis dependiente sobre el retardo de la polimerización. La prueba de comparacion multiple reportó diferencias no significativas entre las concentraciones de trabajo (p>0.05). Se obtuvo un porcentaje de hemólisis bajo con un pequeño aumento para la razón molar 1:10 al comparar con el resto (p<0.05%), aunque no se obtuvo una tendencia de forma general en todo el estudio; demostrándose la ausencia de efectos citotóxicos para hematíes, su blanco de acción farmacológica. Los signos y síntomas observados pudieran relacionarse con alguna toxicidad inherente a la vainillina, sin embargo, la pronta recuperación y la no aparición de muerte demuestran que su efecto lesivo parece ser muy bajo. Los parámetros hematológicos y bioquímicos se comportaron para todos los grupos experimentales dentro de los rangos permisibles establecidos por la literatura para la especie animal. La vainillina no ocasiona, en las dosis evaluadas en conejos, alteraciones clínicas o anatomopatológicas, aunque sí altera ostensiblemente, a las dosis de 1000 y 1600 mg/Kg, el
crecimiento normal de los animales.

 

Evaluación de la 2-fenil-4,4-bis-(hidroximetil)-2-oxalazina en dos modelos experimentales de epilepsia

Milena Díaz Molina, Héctor Pérez Saad, Nora Sánchez Rodríguez y Margarita Bu Wong

Departamento de Química Básica. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de la Habana. San Lázaro y L. Ciudad Habana. Cuba.
Laboratorio de Neurología Experimental
Instituto de Neurología y Neurocirugía.

Compuestos de tipo oxazolínicos han mostrado actividad sobre el sistema nervioso central, con efectos y aplicaciones diversas como depresores, anestésicos, anticonvulsivantes, etc. El objetivo del presente trabajo es evaluar el posible efecto de la 2-fenil-4,4-bis (hidroximetil)-2-oxazolina (OX) obtenida por síntesis química bajo microondas, en dos modelos experimentales de epilepsia: el choque electroconvulsivo por estimulación repetitiva en ratones y el de inducción de crisis convulsiva por estímulo audiogénico en el gerbo mongol. La dosis de 150 mg/Kg de OX redujo el número de pulsos eléctricos necesarios para inducir la crisis tónica producida por el choque eléctrico, así como su duración. Esta misma dosis bloqueó las crisis inducidas por el estímulo audiogénico en el gerbo, disminuyendo significativamente su severidad (grados de crisis) y ocurrencia. Estos resultados permiten afirmar que OX presenta un efecto antiepiléptico muy probablemente relacionado con una inhibición de la sinapsis glutamatérgica en el hipocampo.

 

Efecto anestésico local de la 2-fenil-4,4-bis-(Hidroximetil)-2-oxazolina

Milena Díaz Molina, Héctor Pérez Saad y Michel García Cabrera

Departamento de Química Básica. Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de la Habana. San Lázaro y L.
Departamento de Neurología Experimental. Instituto de Neurología y Neurocirugía.

Algunas aril-oxazolinas han sido descritas como sustancias activas sobre el SNC, con efectos y aplicaciones diversas como depresoras, anestésicos, anticonvulsivantes, etc. En el presente trabajo se llevó a cabo la determinación de las dosis efectivas y letales de la 2-fenil-4,4-bis-(hidroximetil)-2-oxazolina (OX), obtenida por síntesis química bajo irradiación de microondas, la cual presenta un perfil neurofarmacológico de analgesia de mecanismo periférico. Se incluye la comparación de dicho efecto con la lidocaína, utilizando el método de Litchfield y Wilcoxon, así como la determinación de la influencia de OX en la variación de la amplitud y de la velocidad de conducción del potencial de acción muscular compuesto (PAMC), durante la estimulación supramáxima del nervio ciático en ratones. Los resultados obtenidos muestran un índice terapéutico de OX más de dos veces superior al de la lidocaína, así como una reducción significativa de la amplitud y de las velocidades de conducción del PAMC para las dosis de 750 mg/kg y de 50 mg/kg de OX y lidocaína, respectivamente, lo que evidencia que el efecto de analgesia periférica de OX se debe a una acción anestésica local.

 

Efecto del ozono sobre dos isoformas de la superóxido dismutasa y el balance Redox celular en un modelo nexperimental de diabetes

Dranguet J, Heredia E y León O

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de la Habana.
Laboratorios Farmacéuticos LIORAD

La diabetes Mellitus constituye uno de los problemas de salud que mayor afectación causan en el mundo entero. Los pacientes con Diabetes Mellitus tienen un alto riesgo a sufrir complicaciones micro y macroangiopática que están relacionada con el estrés oxidativo y conllevan a la progresión de la enfermedad. Recientemente se ha comprobado la eficacia del ozono en el tratamiento de esta afección metabólica y la disminución del estrés oxidativo pues este mostró capacidad para regular una de las ERO más importantes, el radical superóxido (O2*-) por aumento en la actividad de SOD mediante un probable mecanismo que involucra la expresión génica. Teniendo en cuenta lo antes planteado y el bajo potencial secuestrador de ERO por la células ß pancreáticas decidimos realizar el estudio acerca del efecto del ozono sobre las isoformas de la SOD en homogenado de páncreas, fracción citosólica y mitocondrial en un modelo de diabetes inducida por estreptozotocina (STZ), para lo cual utilizamos ratas SD con un peso entre 240 y 270 (g) separadas en tres grupos de trabajo experimentales: (1) Grupo control no diabético, (2) tratado con STZ 45 mg/Kg vía intraperitoneal (i.p) y (3) grupo tratado con STZ más O3/O2 10 tratamientos 1mg/Kg vía rectal y además realizamos ensayos bioquímicos que nos permitieran evaluar el efecto del mismo sobre el estrés oxidativo y el control de la hiperglicemia. Una vez realizado el diseño experimental propuesto obtuvimos que el ozono permitió el restablecimiento de los niveles sericos de glucosa al intervalo de normalidad. De igual forma controló el estrés oxidativo, siendo más significativos sus efectos sobre la fracción citosólica puesto que en este caso el Glutatión reducido arrojó valores que sobrepasaron al control no diabético, y la actividad de la SOD mostró un comportamiento semejante. Esto nos sugiere que el ozono ejerce un efecto sobre la fracción citosólica por lo que sus acciones estimulantes sobre la Superóxido dismutasa parece ser fundamentalmente sobre la isoforma Cu-Zn dependiente.

 

Un acercamiento al sistema de clasificación biofarmacéutico: su impacto sobre la política regulatoria cubana

Jorge Duconge

Instituto Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana.

Un sistema de clasificación biofarmacéutica ha sido propuesto y está actualmente bajo consideración por autoridades reguladoras en diversas partes del mundo, incluyendo nuestro país, donde el CECMED ha comenzado a promover su interés en establecer una política nacional que marque las pautas de su futura implementación oficial. En el campo concreto de la bioequivalencia existe un enorme potencial para reducir las exigencias regulatorias a la luz de la ciencia vertida por el sistema de clasificación, y el CECMED ha dado sus primeros pasos en este sentido, mediante oportunas recomendaciones en la propuesta de regulación para ensayos de disolución. En base al lógico interés que ha despertado este tema se presentan los aspectos más relevantes de su postulación y las principales aplicaciones del mismo, con énfasis en las regulatorias, así como se ofrece un apropiado marco de actualización del estado del arte en relación con la validación de sus fundamentos científicos.

 

Disposición tópica de dos jaleas de 125i-rhegf en lesiones de piel en ratas

Lázaro Estrada

Hospital Militar Carlos J. Finlay. Habana, Cuba.

Los factores de crecimiento son una estrategia terapéutica efectiva. Sin embargo, algunas controversias han surgido sobre su eficacia en tratamientos de lesiones tópicas. Su estabilidad n la lesión y la ocupación prolongada del receptor son importantes factores en la reparación el daño. En este estudio evaluamos los perfiles de acumulación de dos formulaciones que contienen 10 ó 20 mg de 125I-rhEGF por gramo de jalea, en modelo de lesión de grosor total en piel de rata, reportándose una prolongada permanencia en la lesión, para ambas fortalezas, respecto a soluciones salinas previamente estudiadas. Estas dos formulaciones tópicas proveen cantidades sostenidas de 125I-rhEGF sobre el periodo de muestreo, lográndose la requerida respuesta en términos de proliferación celular, deposición de colágeno y síntesis de proteína. Estudios posteriores necesitan ser desarrollados para dilucidar sí tal patrón de disposición in vivo es consistente con la promoción más temprana y potente de los eventos de cicatrización.

 

Influencia de agentes antisickling en la polimerización de la hemoglobina S por resonancia magnética

José E. Falcón Dieguez, Grisel Del Toro García y Yamirka Alonso Geli

Departamento de Biofísica, Centro de Biofísica Médica, Universidad de Oriente, Patricio Lumumba s/n, 90500, Santiago de Cuba, Cuba E. mail: falcon@cbm.uo.edu.cu

La formación de un aducto o base shiff hemoglobina-aldehído aromático ha sido reportada como inhibidor de la polimerización de la hemoglobina S (HbS). Utilizando la Relajación Magnética Nuclear Protónica (RMN-1H) se puede seguir la cinética de polimerización de la HbS y determinar el tiempo de demora (td) o nucleación. Nuestros estudios demuestran la actividad inhibidora de la isovainillina, la ortovainillina y el p-hidroxibenzaldehído, utilizando razones molares (HbS/Compuesto) 1:1, 1:4 y 1:8; lo cual se refleja en el incremento del td y su porciento de variación (%Vtd) para cada una de las concentraciones ensayadas. Se obtuvo un orden de reactividad: isovainillina [33.6 ± 6 (1:1), 68.4 ± 16 (1:4)] > ortovainillina [26.3 ± 10 (1:1), 62.9 ± 20 (1:4)] > p-hidroxibenzaldehído [10.2 ± 2.9 (1:1), 32.3 ± 8.4 (1:4)]. Durante el experimento para las muestras tratadas a la razón molar 1:8 no se obtuvo la curva sigmoidal característica de la cinética de polimerización. De este modo, incrementando la concentración de los compuestos se retardó la polimerización de la HbS con el alargamiento del tiempo de demora. Los resultados confirman la actividad antisickling de estos aldehídos aromáticos, por una técnica diferente a la reportada en literatura, que permite además cuantificar el efecto de la concentración y posibilitará el seguimiento y estudio de su utilidad terapéutica para el futuro tratamiento de la anemia drepanocítica.

 

Comportamiento de algunos indicadores del estado Redox en diferentes tiempos de isquemia hepática

Niurka Pons Rodríguez, Michel Batista Carvajal, Nelson Merino García, Dalia Álvarez Morejón y Olga Sonia León Fernández

Departamento de Farmacología-Toxicología, Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana.

El daño por isquemia/reperfusión (I/R) es un proceso multifactorial inevitable en el trasplante de órganos. Diversos mecanismos se encuentran asociados al daño, entre los que se destacan la generación de especies reactivas de oxígeno (ERO). En este trabajo se estudió el comportamiento de algunos parámetros del balance Redox en diferentes tiempos de isquemia parcial hepática en ratas. El flujo sanguíneo hacia el lóbulo hepático derecho fue interrumpido por periodos de 60, 90 y 120 min. y se utilizó un grupo control no sometido a isquemia. Se obtuvieron homogenados del lóbulo hepático isquémico para la determinación de los niveles de peróxidos orgánicos totales, malonildialdehído (MDA), glutatión reducido (GSH) y las actividades enzimáticas de catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD). Se obtuvieron muestra de suero sanguíneo para deter minar la actividad de aspartato aminotransferasa (ASAT) y se realizaron cortes del lóbulo isquémico para estudio histológico. Los resultados obtenidos muestran que las concentraciones de GSH y peróxidos orgánicos, así como los niveles de actividad enzimática de SOD no se modificaron en ninguno de los tiempos estudiados. Se encontró un aumento significativo de las concentraciones de MDA para tiempos de isquemia de 120 min. La actividad de CAT no mostró diferencias significativas en ninguno de los tiempos respecto al grupo control, aunque la actividad enzimática disminuyó significativamente a los 120 min. respecto a los 90 min. Desde el punto de vista histológico solo se produjeron algunas modificaciones estructurales moderadas, no encontrándose signos de necrosis en ningún caso. Los niveles de ASAT para todos los grupos fueron similares al del control.

 

Paradigma alométrico en farmacocinética: ¿Realidad o quimera?

Eduardo Fernández Sánchez, Maritza B. Torres1, Jorge Ducongé, María de los A. Bécquer y Daniel Alvárez.

Laboratorio de Farmacocinética, Departamento de Farmacología, Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana, CUBA.

La Alometría, ó la biología del escalado, puede definirse resumidamente como el estudio del tamaño y sus consecuencias. Se ha vuelto una herramienta útil para la fisiología comparada. Aunque su aplicación en Farmacocinética, constituye una aplicación de escasos 20 años, y comienza a generalizarse en los últimos tiempos, en el momento actual constituye el Paradigma mas robusto para el escalado interespecies de parámetros farmacocinéticos, en relación a su extrapolación al humano. A tales efectos, la Food and Drug Administtration de E.E.U:U:, hoy día a modo de recomendación, orienta su uso para la selección de la dosis requerida para iniciar un estudio Fase I. El presente trabajo expone un análisis crítico de la Alometría y su relación con la Farmacocinética, en búsqueda de las características invariantes de tiempo-espacio. Se exponen criterios sobre su aplicación mas general hacia las moléculas sintéticas, pero se explican mas detalladamente las primeras experiencias en el país en cuanto a escalado alométrico de dos moléculas biotecnológicas, anticuerpos monoclonales de origen murino: el AcM antifibrina CBFib.1 y el AcM antitumoral ior egf/r3.

 

Mecanismos de acción de la clortalidona en células cardiacas

Loipa Galán Martínez, Tania Ferrer Villada, Eduardo Salinasb, Gerardo Orta y Julio Álvarez González

Laboratorio de Electrofisiología, Instituto de Cardiología y Cirugía Cardiovascular, 17 esq. A, # 702, Vedado, Plaza, CP 10400, Ciudad Habana, CUBA.
Laboratorio de Fisiología Cardiovascular, Instituto de Fisiología, Universidad Autónoma de Puebla, Puebla, MEXICO.

En el tratamiento a largo plazo, los diuréticos tiazídicos como la clortalidona disminuyen la presión sanguínea porque disminuyen la resistencia periférica más que por su efecto diurético. Esta acción se le ha atribuído por la apertura de canales de potasio activados por calcio en células del músculo liso vascular. Sin embargo, se conoce muy poco acerca de sus acciones celulares cardíacas. Estudiamos las acciones de la clortalidona sobre el potencial de acción cardíaco y sobre la actividad contráctil de músculos papilares de ventrículo de rata, sobre la actividad eléctrica (electrocardiograma- ECG) y contráctil de corazones espontáneos de rata (Langendorff) y sobre las corrientes de sodio y calcio de cardiomiocitos ventriculares aislados de rata (técnica de "patch-clamp"). La clortalidona disminuyó la fuerza de contracción ventricular con una IC50 de 60 microM tanto en los músculos papilares como en el corazón íntegro y no produjo efectos significativos sobre el intervalo RR y QT del ECG. La clortalidona en todo el rango de concentraciones estudiadas disminuyó ligeramente la duración del potencial de acción al 20 y al 80 % de repolarización y la velocidad máxima de despolarización disminuyó como en un 30 %. A nivel de célula aislada, la clortalidona en todo el rango de concentraciones estudiadas, inhibió la corriente rápida de sodio en un 80 % y la corriente de calcio tipo L la inhibió con una IC50 de 55 microM. En conclusión, la clortalidona a altas concentraciones posee una acción inotrópica negativa que puede deberse a sus acciones bloqueadoras sobre las corrientes de sodio y calcio.

 

Inhibición de algunos parámetros de la respuesta alérgica por el extracto acuoso de Mangifera indica l (Vimang) y la Mangiferina

Dagmar García Rivera, Ivones Hernández, Alina Álvarez, Lucía Márquez, Belkis Cancio, José A Valdez, Gipsy Quintero y René Delgado

Laboratorio de Farmacología. Departamento de Investigaciones Biomédicas. Centro de Química Farmacéutica. La Habana. Cuba. E-mail:dagmarg@cqf.co.cu

El extracto acuoso de Mangifera índica L (Vimang) ha sido utilizado durante años por la población cubana, por sus propiedades anti-inflamatorias. El objetivo del presente estudio fue evaluar el posible efecto antialérgico del Vimang y la mangiferina (una glucoxilxantona de composición mayoritaria en el extracto), mediante la caracterización de sus efectos en la producción de IgE, la respuesta anafiláctica cutánea, la producción de histamina y la desgranulación mastocitaria. Para tal propósito, se inmunizaron ratones Balb/C con ovoalbúmina, y se trataron durante 21 días con diferentes dosis de Vimang o Mangiferina, utilizando como control positivo el Ketotifeno. Para la determinación de los títulos de IgE, se testaron los sueros correspondientes a estos ratones en pruebas de anafilaxia pasiva en ratas. Para la evaluación del efecto del Vimang y la mangiferina sobre la desgranulación mastocitaria en pruebas de anafilaxia pasiva cutánea, se trataron ratas Wistar durante 21 días con las sustancias de ensayo y Comoglicato sódico como control positivo, y posteriormente se testaron en dichas ratas, diferentes diluciones de sueros de IgE de título conocido. El efecto sobre la producción de histamina y la desgranulación mastocitaria se determino mediante la activación de los mastocitos peritoneales con el compuesto 48/80, un conocido desgranulador mastocitario. Los resultados obtenidos demuestran que el tratamiento con Vimang y mangiferina inhiben la producción de IgE en los ratones inmunizados con ovoalbúmina, inhiben la respuesta de anafilaxia pasiva cutánea en ratas, probablemente por un efecto estabilizador de la membrana de mastocitos, efecto similar al del cromoglicato sódico. Igualmente, inhiben la producción de histamina por los mastocitos, así como la desgranulación de los mismos. Estas evidencias experimentales pueden sugerir la utilización terapéutica del Vimang en enfermedades alérgicas, incluida el asma bronquial.


Evaluation of redox status in Cuban hiv infected children by vertical way

Lizette Gil, Ida González, Randelys Molina y Rolando Tápanes

Hospital, Institute "Pedro Kourí", Autopista Novia del Mediodia Km 61/2, Havana, Cuba. Box 601, Marianao 13, Ciudad de La Habana (Cuba). E-mail: lgil@ipk.sld.cu

Infection by human immunodeficiency virus (HIV) continues to increase worldwide. The progression of the disease in children may be rapid. Oxidative stress is well documented in adult HIV/AIDS patients. Viral Tat protein plays a role in the intracellular generation of reactive oxygen species thus increasing apoptotic index, and depleting CD4+ T lymphocytes. The aim of this study was to investigate an extensive array of redox status indices: glutathione (GSH), malondialdehyde (MDA), peroxidation potential, total antioxidant status, glutathion peroxidase (GPx), superoxide dismutase (SOD), Total hydroperoxide (TH) and DNA fragmentation in AIDS pediatrics patients compared to healthy subjects. Blood samples from 11 pediatric patients and 22 healthy subjects were tested by spectrophotometric techniques in order to measure oxidative stress indices. Both a reduction of GSH levels and an increase in MDA and TH levels were detected in the plasma of AIDS patients. These patients also showed an increase of DNA fragmentation in lymphocytes as well as a reduction of GPx and an increase in SOD activity in erythrocytes. Relatively to the control group, AIDS patients had differences in global indices of total antioxidant status. These results contribute to the evidences that substantial oxidative stress occurs during AIDS pediatric infection.

 

Comportamiento de parámetros asociados al estrés oxidativo en la citotoxicidad inducida por 1-O-alquilgliceroles sobre la línea N2A

Marian Hernández, Julio R. Fernández, Yolanda Valdés, José L. León y F. Merchán

Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de la Habana
Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología, Ciudad de la Habana

Los 1-O-alquilgliceroles constituyen una familia de compuestos que en nuestro país se estudian desde hace dos décadas por sus potencialidades sobre el proceso inflamatorio, metastizante y angiogénico, y que son sintetizados en el Departamento de Química Básica del IFAL-UH. Las propiedades antitumorales "in vitro" de dos miembros de esta familia, C16 y C18, sobre la línea N2a de neuroblastoma murino fueron demostradas por Hernández en el 2002. Dichas propiedades incluyen la presencia de diferenciación celular, y apoptosis a concentraciones más elevadas, además de efecto citotóxico dependiente de concentración. En este trabajo se estudia la influencia sobre parámetros asociados al estrés oxidativo de la citotoxicidad y diferenciación inducida p! or estos compuestos. Se determinaron los niveles de Oxido nítrico, Glutatión reducido, Organoperóxicods totales y Malonildialdehído en sobrenadantes de cultivos de la línea N2a tratados con concentraciones citotóxicas y diferenciantes de C16 y C18. Se encontró marcada disminución de los niveles de nitritos totales para todas las concentraciones de C16 y C18 ensayadas, así como no existió variación en los niveles de GSH. Los organoperóxidos totales se incrementaron para todas de las concentraciones citotóxicas, así como los niveles de MDA, estos últimos con un comportamiento en forma de campana. A partir de estos resultados puede concluirse que existe influencia del fenómeno de estrés oxidativo en la citotoxicidad y diferenciación inducida por C16 y C18, pero dicha influencia no es dependiente de concentración. Al parecer el daño citotóxico es en parte mediado por daño oxidativo a la membrana y generación de peróxidos oxidantes.


El precondicionamiento oxidativo con ozono (preozono). Un mecanismo que explica la eficacia de la ozonoterapia en el síndrome izquémico

Olga Sonia León Fernández, Hussam y H. Ajamieh

Centro de Investigaciones y Evaluaciones Biológicas (CIEB)-IFAL-UH

El precondicionamiento Oxidativo por Ozono fue invocado, y demostrado experimentalmente en 1998 por León y col., como un proceso que estimulando sistemas antioxidantes endógenos protegía contra estados fisiopatológicos mediados por Especies Reactivas de Oxígeno (ERO). La validez de esta propuesta de mecanismo se ha venido corroborando, por estudios ulteriores, en modelos de isquemia/reperfusión hepática y otros estados de enfermedad. Se analizan y discuten los efectos de la administración rectal de ozono sobre importantes enzimas protectoras contra el estrés oxidativo (Xantina Oxidasa, Superoxido Dismutasa y otras). Se demuestra que el PreOzono regula las concentraciones de Óxido Nítrico y la síntesis de novo de proteínas, inhibe la expresión de la subunidad p65 de NF-kB así como los niveles TNFa. Los resultados de la microscopía óptica y electrónica demostraron la preservación de la integridad morfológica del hígado y la mitocondria. La protección confrida por el tratamiento con ozono indica que esta alternativa terapéutica puede ser efectiva contra el daño al hígado, mediado por la isquemia/reperfuión, en el trasplante del órgano.


Estrategias para establecer el diagnóstico del estado Redox

Gregório Martinez Sánchez, Rosemeres Horwat Delaporte, Attilia Giuliani y Olga Sonia León Fernández

Centro de Investigaciones y Evaluaciones Biológicas, Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana, Cuba.
Instituto Superior de Ciências Farmacêuticas e Bioquímica, Universidade Paranaense - UNIPAR, Praça Mascarenhas de Morais, s/n, Umuarama, Pr., Brasil.
Department of Chemistry and Medical Biochemistry, University of Milan, Via Saldini Milan, Italy

The methodology for the detection of the oxidative stress status at world level is disperses. In occasions useful methods are used for the investigation but they has non applicable to the clinic diagnostic. In Cuba in spite of having a high prevalence of illnesses in which Reactive Oxygen Species are involved (cancer, diabetes, and others) an integral diagnostic systems have not been developed. It is also insufficient the education and preparation of the professional personnel (doctors and related health personnel) to face the analysis of the data that contributes to a antioxidant/pro-oxidant diagnostic and to impact in the modification of life habits and other measure directed to correct the redox disruption. In the CEIEB-IFAL-UH it was validate a group of analytic methods for the diagnosis of the oxidative stress. The validated analytic methodology was permit to establish the reference values in normal populations, an individualized diagnostic as base to establish the adequate medical prescription, to fallow the evolution of chronic oxidative disorder and follow the effect of nutritional or pharmacological intervention. The methodology include clinical marker of biomolecule damage, antioxidant enzymes, concentration of low level antioxidant, an indicator of total antioxidant status. The analytic methodology was adaptable to micro and ultramicro analytic systems and was validated according to the international recommendations.

 

Excretion study of danazol. New metabolites proposed for doping control

Montes de Oca Porto R.; Rodríguez A; Martínez D; Sánchez Bruzón J.F y Correa Vidal T.

Antidoping Laboratory, La Habana, Cuba.

Anabolic androgenic steroids are forbidden by the International Olympic Committee (IOC) and World Antidoping Agency (WADA) Danazol (17a-pregna-2,4 dien-20-ynol[2,3-D]isoxazol-17ß- ol), is a synthetic derivative of ethisterone structurally related to stanozolol (17 a-methyl-17 ß- hydroxy-5a-androst-2-enol[3,2C]pyrazole) and stanozolol (17 a-methyl- ß-hydroxy-5a-androst-2-enol[3,2C]pyrazole). For this reason its use as doping agent has been investigated. Danazol (Runch®) (200 mg) were orally administered to two healthy male volunteers. Urine samples were colleted up to 1 week post-dose and stored at 4 oC. The samples were analyzed by the procedures "Detection and Confirmation of anabolic agents excreted in free form procedure 4A), "free and conjugated form" (procedure 4B) and "High sensitive detection of anabolic agents excreted in free and conjugated form by MS/MS (procedure 4C). Three new metabolites have been identified in addition to the 5 previously reported. The excretion profile of each metabolite is presented. We conclude that new metabolites can be included for the detection of danazol abuse since the main metabolite ethisterone is the first metabolite being completely excreted. We propose the monitorization of 2-Hydroxymethyl-6â-OH-Dehydroethisterone and 2î, 6î, 16î Hydroxymethyl-Ethisterone by free fraction analysis (procedure 4A). The last one presented a longer term elimination compared to the rest of all metabolites. In a same way we proposed to detect a mono-hydroxylated metabolite of 2î, 6î-Hydroxymethyl-Ethisterone in the conjugated fraction (procedure 4B).

 

Comportamiento de algunos indicadores del estado Redox en diferentes tiempos de isquemia hepática

Niurka Pons Rodríguez, Michel Batista Carvajal, Nelson Merino García, Dalia Álvarez Morejón y Olga Sonia León Fernández

Departamento de Farmacología-Toxicología, Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana. E-mail: niurka@cieb.sld.cu

El daño por isquemia/reperfusión (I/R) es un proceso multifactorial inevitable en el trasplante de órganos. Diversos mecanismos se encuentran asociados al daño, entre los que se destacan la generación de especies reactivas de oxígeno (ERO). En este trabajo se estudió el comportamiento de algunos parámetros del balance Redox en diferentes tiempos de isquemia parcial hepática en ratas. El flujo sanguíneo hacia el lóbulo hepático derecho fue interrumpido por periodos de 60, 90 y 120 min. y se utilizó un grupo control no sometido a isquemia. Se obtuvieron homogenados del lóbulo hepático isquémico para la determinación de los niveles de peróxidos orgánicos totales, malonildialdehído (MDA), glutatión reducido (GSH) y las actividades enzimáticas de catalasa (CAT) y superóxido dismutasa (SOD). Se obtuvieron muestra de suero sanguíneo para deter minar la actividad de aspartato aminotransferasa (ASAT) y se realizaron cortes del lóbulo isquémico para estudio histológico. Los resultados obtenidos muestran que las concentraciones de GSH y peróxidos orgánicos, así como los niveles de actividad enzimática de SOD no se modificaron en ninguno de los tiempos estudiados. Se encontró un aumento significativo de las concentraciones de MDA para tiempos de isquemia de 120 min. La actividad de CAT no mostró diferencias significativas en ninguno de los tiempos respecto al grupo control, aunque la actividad enzimática disminuyó significativamente a los 120 min. respecto a los 90 min. Desde el punto de vista histológico solo se produjeron algunas modificaciones estructurales moderadas, no encontrándose signos de necrosis en ningún caso. Los niveles de ASAT para todos los grupos fueron similares al del control.

 

Reconocimiento "in vivo" por inmunogammagrafía de tumores de origen epitelial con los anticuerpos monoclonales ior c5, ior egf/r3 y hR3 humanizado

Mayra Ramos Suzarte

Centro de Inmunología Molecular

En Cuba se han desarrollado Anticuerpos Monoclonales (AcMs) que reconocen con alta afinidad antígenos tumor asociados. El objetivo de este trabajo fue demostrar que los AcM murinos ior c5, ioregf/r3 y el AcM humanizado hR3 pueden reconocer tumores de origen epitelial por Inmunogammagrafía. Se estudiaron durante 1992-1999, pacientes entre 18 y 85 años de edad, de cualquier sexo y etnia, portadores de tumores de origen epitelial. Los AcM fueron marcados previamente con 99mTc con una eficiencia superior al 95 %. Se evaluaron 301 pacientes: 148 con el AcM ior egf/r3, 14 con el hR3, 59 con el ior c5 y 80 combinado en el mismo paciente los AcMs ior c5 e ior cea 1. Se suministró la dosis prevista por vía endovenosa en forma de bolo y se tomaron imágenes inmunogammagráficas anteriores y posteriores de tórax, pelvis y abdomen a los siguientes tiempos: 1,2, 4 y 24 horas posteriores a la administración el radiofármaco. La sensibilidad y la precisión diagnóstica fue superior al 85 %. No se encontraron lesiones falsas positivas. No se detectaron eventos adversos. Los AcMs ior c5, ior egf/r3 y hR3 son útiles en el diagnóstico de los tumores primarios de origen epitelial, sus metástasis y recidivas post quirúrgicas. Está tecnología se convierte en una "prueba de concepto" para la inmunoterapia con estos AcM.

 

Estudio de farmacocinética comparada entre ASH(+) epocim y ASH(-) epocim, en conejos f1

Leyanis Rodríguez Vera

Departamento Química Básica, Instituto de Farmacia y Alimentos, Universidad de La Habana. E-mail: Leyanis@ifal.uh.cu

El Centro de Inmunología Molecular ha reorientado la estrategia de producción de la eritropoyetina humana recombinante, para incrementar su seguridad, al sustituir la albúmina por tres aminoácidos menos inmunogénicos. En el presente trabajo se muestran los resultados del estudio farmacocinético comparativo exigido por la autoridad reguladora en la fundamentación de una equivalencia biológica entre dos variantes de EPOCIM.. Ambas mostraron patrones de disposición típicos en biológicos, con rápidos ritmos de depuración sistémica y corta vida media. Notable la tendencia a una declinación mono-exponencial regular, sin fluctuaciones abruptas, característica de un bolo endovenoso, con volúmenes de distribución cercanos al volumen plasmático del conejo, sugiriendo un patrón vascular. No se encontraron diferencias significativas en sus respuestas farmacocinéticas, lo que permite considerar la variante ASH(-)EPOCIM. como un similar de la variante ASH(+)EPOCIM.. Se concluye que no deben esperarse cambios relevantes en su disposición sistémica, y consecuentemente en la respuesta biológica, producto de la modificación realizada.

 

Metodología para el tamizaje antitumoral de un compuesto dado. 1-dodecilglicerol como antitumoral: estado actual y perspectivo

Hélade Sotomayor, Víctor Brito, Yolanda Valdés y Juan C. Rodríguez

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Cuba.

El cáncer ha devenido un problema de salud a nivel mundial, ya que constituye la segunda causa de muerte en adultos en el mundo desarrollado y en muchos países en vías de desarrollo. Múltiples son las estrategias terapéuticas en la lucha contra esta enfermedad. En este sentido, el empleo de agentes quimioterapéuticos ha desempeñado un papel muy importante. El desarrollo de un producto como quimioterápico implica, en su primera etapa, la realización de estudios preclínicos y, dentro de ellos, es de fundamental importancia el tamizaje antitumoral. En el presente trabajo, se expone la Metodología para el Tamizaje Antitumoral de un compuesto dado y se examinan los resultados obtenidos hasta el momento en la evaluación como tal del 1-O-dodecilglicerol sintético, éter lipídico de la familia de los alquilgliceroles, enfatizando en el estado actual y perspectivo de la investigación al respecto.

 

Citotoxicidad del 1-o-dodecilglicerol sintético sobre la línea tumoral de carcinoma de mama MCF-7

Hélade Sotomayor, Víctor Brito, Julio César, José Luis León, Francisco Merchán y Yolanda Cristina Valdés

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Cuba

Los Éteres Lipídicos (E.L), como modificadores de las respuestas biológicas, introducen un nuevo concepto terapéutico en el tratamiento de múltiples afectaciones humanas mostrando diferentes efectos farmacológicos. Los 1-O- Alquilgliceroles (AQG), análogos estructurales de esta familia de compuestos, conservan el grupo 1-O-Alquilo de cadena larga al que se le atribuyen la mayoría de sus efectos farmacológicos que poseen los más complejos E.L. Teniendo en consideración esta similitud estructural y con la finalidad de completar los ensayos correspondientes al tamizaje antitumoral del 1-O-Dodecilglicerol (DDG) sintético, nos propusimos estudiar los efectos citotóxicos de éstos sobre la línea tumoral humana de carcinoma de mama, MCF-7, a dos concentraciones celulares. El DDG exhibió efectos citotóxicos sobre la línea tumoral MCF-7, siendo estos efectos esencialmente dependientes de la concentración de 1-O-alquilglicerol y de la concentración celular.

 

Estudio de la actividad antitumoral in vivo del 1-O-hexadecilglicerol en diferentes modelos experimentales

Hélade Sotomayor, Theudis Mosquera, Juan C. Rodríguez, Yolanda Valdés, José Luis León, Francisco Merchán y Beatriz González

Instituto de Farmacia y Alimentos. Universidad de La Habana. Cuba.

Los éteres lipídicos (E.L.), modificadores de las respuestas biológicas, se emplean en el tratamiento de múltiples afectaciones humanas al presentar una gran variedad de efectos, entre ellos, los antitumorales directos, antinvasivos y antinflamatorios. Los 1-O-Alquilgliceroles (A.G.) son análogos estructurales de los E.L. ya que portan el grupo 1-O-Alquilo de cadena larga al que se le atribuyen sus actividades farmacológicas. En este trabajo se presentan los resultados obtenidos al evaluar la actividad antitumoral directa in vivo del 1-O-hexadecilglicerol sintético (C16) en diferentes modelos tumorales murinos. El C16 se mostró activo frente al Adenocarcinoma 755 y al Carcinoma de Lewis, al producir un aumento de la sobrevida en el primer caso y reducir el peso y el volumen tumoral en el otro. El C16 también inhibió de manera significativa la invasión pulmonar en el Carcinoma de Lewis. Se encontraron también buenos resultados al emplearlo en un esquema de terapia combinada con 5-Fluoruracilo, aplicado en diferentes etapas del desarrollo del Adenocarcinoma 755.

 

Antioxidant potential and bioavailability of anthocyanins

Tesuya Konishi, Takashi Ichiyanagi y Mumnur Rharman

Niigata University of Pharmacy and Applied Life Sciences (NUPALS). Department of Functional Food Sciences. Niitsu City, Niigata, 956-8603 Japan. E-mail: konishi@niigata-pharm.ac.jp

Recently, benefitial effects of edible plants on human health have attracted much attention and extensive studies are going on to clarify the ingredients preventing diseases such as cancer. Flavonoids are the one having been studied their wide variety of physiological functions. Anthocyanins are the redish purple pigments present in colored vegetables and fruits. They are a family of flavonoid and implicated also having many physiological functions including vision improvement, anticancer and so on. However, the reaction and bioavilability studies have not been extended compared to these of other flavonoids because of their chemically unstable nature, especially at alkaline pH. We simultaneously compared the antioxidant properties of fifteen anthocyanins present in bilberry extract (five aglycons and three conjugated sugars) in vitro and showed their reactivity profile towards reactive oxygen and nitrogen species. Among them, delphinidins carrying the pyrogallol structure on the aglycon B ring showed extremely high reactivity toward radicals and peroxinitrite. In order to know further the bioavailability of delphinidins, the absorption and metabolism of delphinidin-3-O-b-D-glucopyranoside (Dp3G) were studied in rats. Dp3G appeared quickly in blood plasma after oral administration and it was suggested that Dp3G was absorbed from stomach and also from intestine in its intact form. Further observation revealed that Dp3G was transformed into one major metabolite in tissues, especially in live. From the molecular mass of the metabolite determined by MS indicated that Dp3G was methylated. The chemical structure of the metabolite was finally assigned to 4'-O-methylated Dp3G by NMR analysis. From this finding, biotransformation path of flavonoids in animals was generalized such that methylation occurs preferentially at 4'-OH rather than 3' or 5' -OH in the case of pyrogallol B ring but 3'-OH in the case of catechol B ring. Further analysis of the absorption and metabolism of anthocyanins in bilberry extract revealed that methylated anthocyanins such as peonidin, petunidin and malvidin are preferentially distributed in tissues, although they showed rather lower antioxidant activities than their original analogues carrying free OH group in vitro. From these studies above, it was strongly suggested that metabolic and bioavailability studies are quite important to evaluate functional roles of food factors showing high antioxidant potential in vitro.

 

Evaluación farmacocinética a dosis única del 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído utilizando diferentes vehículos

Yoagne M. Trapero Quintana, Carlos A. Gonzáles Delgado, Maria A. Torres Alemán, Lourdes Olivera Ruano, Armando Correa, Carmen Carrillo Domínguez y Claudia Montero Alarcón

Departamento de Biofísica, Centro de Biofísica Médica, Universidad de Oriente. Patricio Lumumba s/n, 90500, Santiago de Cuba, Cuba. E-mail: ymtquin@infomed.sld.cu
Universidad de la Habana, Instituto de Farmacia y Alimentos (IFAL)
Centro Nacional de Toxicología CENATOX
Dirección de la Unidad de Ciencia y Técnica de Base, Control Biológico del Centro de Investigación y Desarrollo de Medicamentos CIDEM

El 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído es un candidato a fármaco para la Hemoglobinopatía SS, enfermedad para la cual no existe actualmente un tratamiento efectivo en el mundo. Siendo necesario el desarrollo de los estudios preclínicos del mismo con una formulación que garantice su biodisponibilidad. Las referencias que existen de los estudios toxicológicos del 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído solo reportan su administración como componente de la dieta animal, no resultando seguro el cálculo de la cantidad realmente absorbida y la desperdiciada, por lo que se hace necesario realizar un estudio de preformulación para buscar el vehículo que favorezca una mejor absorción y que se pueda utilizar en los estudios preclínicos de este producto a través de la administración oral por intubación gástrica. Es por ello que se determinaron algunos parámetros farmacocinéticos (ABCtotal, Cmax, tmax, Ke, t½, MRT, Tlag, Frel), en 3 formulaciones (carboximetilcelulosa al 0.5%, carboximetilcelulosa al 2% y solución hidroalcohólica al 15%, como referencia) con el propósito de buscar la mas adecuada para los estudios toxicológicos del 4-hidroxi-3-metoxibenzaldehído. Se trabajó con ratas Wistar, se probaron las 3 formulaciones seleccionando finalmente la de carboximetilcelulosa al 0.5% que ofreció los niveles plasmáticos que garantizan un adecuado nivel de exposición, determinado a través de un método analítico por Cromatografía Líquida de Alta Eficacia validado en el Centro Nacional de Toxicología.

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