Instituto de Hematología e Inmunología, Ciudad de La Habana,
Cuba
Estudio de la transaminasa glutámico-pirúvica sérica
y detección de anticuerpos anti-virus de la hepatitis C en donantes de
sangre
Dra. Renée González Sampedro, Lic. René Rivero
Jiménez y Dr. Porfirio Hernández Ramírez
RESUMEN
Se estudió la transaminasa glutámico-pirúvica sérica
en 3 744 donantes de sangre. En el 0,93 % se hallaron valores elevados. Se
comparó la prevalencia de anticuerpos contra el virus de la hepatitis
C en un grupo de donantes con la transaminasa normal y aumentada. Las determinaciones
de seroprevalencia de anticuerpos se realizaron por 2 métodos de inmunoensayo
enzimático: uno de la firma Ortho y el otro del Centro de Ingeniería
Genética y Biotecnología/Empresa "Finlay", de Cuba. No se encontró
diferencia significativa al comparar ambos métodos, excepto en la prevalencia
de anticuerpos entre donantes con la transaminasa normal y elevada, determinada
por este último método, con una p < 0,05. Se senaló
la utilidad de determinar esta enzima en el control habitual de la sangre
posdonación.
Palabras clave: ALANINA AMINOTRANSFERASA/sangre; ANTICUERPOS ANTIHEPATITIS/inmunología;
VIRUS DE LA HEPATITIS C/inmunología; DONADORES DE SANGRE; ELISA.
INTRODUCCION
Las hepatitis virales no-A, no-B son causadas principalmente por 4 virus
diferentes por su biología y su morfología. Existen 2 tipos
de hepatitis: la del tipo I en la hepatitis esporádica, como la
transmitida por el virus de la hepatitis C (VHC) y las del II corresponden
a un tipo epidémico de hepatitis y son producidas por virus más
pequeños.1 El VHC se transmite por la vía parenteral
y se considera responsable de aproximadamente el 85 % de las hepatitis
postransfusionales no-A, no-B.2 La infección debida a
este virus es habitualmente persistente, con un período de incubación
prolongado de 2 a 3 meses y aunque menos de la tercera parte de los sujetos
afectados presentan manifestaciones clínicas, se ha demostrado que
en el 50 % de los pacientes infectados se encuentran niveles elevados o
fluctuantes de transaminasa glutámico-pirúvica sérica
(TGP) durante meses o años, con una evolución hacia la hepatitis
crónica activa o hacia la cirrosis hepática en el 20 % de
éstos.3 El genoma de este agente fue clonado, lo que
permitió desarrollar distintas técnicas para detectar anticuerpos
(Acs) contra las proteínas virales, basadas en métodos recombinantes.
El primero con licencia comercial que detecta Acs contra la proteína
no estructural C100-3 y utiliza un sistema de inmunoensayo enzimático
sobre fase sólida (ELISA), fue el de la Ortho Diagnostic Systems
INC, E.U.A.4 En el Centro de Ingeniería Genética
y Biotecnología y la Empresa de Productos Biológicos "Carlos
J. Finlay" (CIGB/EF) de Cuba, se desarrolló un sistema ELISA que
permite detectar Acs tipo IgG anti-proteínas nucleares del VHC en
suero o plasma humano. Existen también pruebas confirmatorias, tales
como la inmunotransferencia recombinante (RIBA) y otras de segunda generación
que incluyen antígenos recombinantes adicionales, ya que pueden
aparecer reacciones falso positivas o puede ocurrir que un donante con
un resultado indeterminado esté realmente infectado por el VHC.5
Además, aunque se utilicen combinaciones de varios métodos,
no se detecta el 12 % de los donantes infectados, lo cual puede deberse
a:
-
Muestras infectantes recogidas durante el período de "ventana" entre
la exposición y la seroconversión.
-
Respuesta humoral reducida en individuos inmunocomprometidos.
-
Variantes del VHC que produzcan Acs que no reaccionan con los antígenos
habitualmente disponibles en los ensayos, por ejemplo, variantes de las
secuencias extremas del VHC, descritas como K2 o tipo 3 del VHC, pues este
virus se ha clasificado en 3 tipos principales denominados 1, 2 y 3, según
el análisis filogenético de las secuencias de una región
del DNA relativamente bien conservada, la (5'NCR) y la NS-3 y NS-5, los
cuales presentan una distribución diferente en las poblaciones estudiadas.6
En Cuba se han realizado varios estudios sobre la seroprevalencia de Acs
anti-VHC en donantes de sangre y en grupos con alto riesgo.2,4
En la mayoría de ellos se han utilizado los 2 métodos de
ELISA ya mencionados, por lo que el objetivo de este trabajo es presentar
un estudio comparativo realizado con ambas técnicas. Por otra parte,
se ha comprobado que los donantes con 2 ó 3 desviaciones estándar
por encima del valor medio de la TGP sérica tienen una seroprevalencia
de Acs anti-VHC 9 veces superior a la de los donantes con TGP normal,7
por lo cual se estudió esta enzima sérica en los donantes
de sangre.
MATERIAL Y METODO
El valor de TGP de 20 u/L, se consideró como límite superior
normal.
Para el análisis comparativo se utilizó el método
de X2:
-
Se determinó la TGP a 3 744 donantes del Banco de Sangre Municipal
de 10 de Octubre por una microtécnica normalizada por A. Alemán
(Comunicación personal), que utiliza placas plásticas de
96 pocillos y un lector ELISA para medir la DO a 492 nm.
-
Se determinaron los Acs anti-VHC en 105 donantes con TGP normal por los
2 métodos ELISA: CIGB/EF y Ortho.
-
Se detectó la prevalencia de los Acs anti-VHC en 126 donantes con
TGP > 20 u/L por el método Ortho y 114 por el método del
CIGB/EF (12 mues-tras no se estudiaron por esta técnica por resultar
muy escasas).
-
Se comparó además la prevalencia de los Acs anti-VHC entre
los donantes con TGP normal por cada técnica y también la
de los donantes con TGP elevada hallada igualmente por ambos métodos.
Para la cuantificación de estos Acs se utilizó un lector
de tiras de micro-ELISA Organon Tecknika con filtro de 492 nm. Se
consideraron positivas las muestras según los valores de corte de
cada método: el promedio de las lecturas de los controles negativos
multiplicado por 1,8 para el del CIGB/EF, y el promedio de los controles
negativos más 400 en el Ortho. Todos los casos con valores iguales
o superiores a los de corte se repitieron por triplicado antes de considerarlos
positivos.
RESULTADOS
-
En los 3 744 donantes estudiados, se encontró el 0,93 % de TGP 20
u/L con un rango de 20 a 73 u/L, un promedio de 29,44 y una desviación
estándar de 10,98.
-
En el grupo de donantes con TGP normal (<20 u/L) la prevalencia de Acs
anti-VHC fue del 3,8 % cuando se determinó por el método
del CIGB/EF y del 0,95 % cuando se determinó por el método
Ortho.
-
En los donantes con TGP elevada (>20 u/L) la prevalencia de Acs anti-VHC
fue del 11,40 % cuando se halló por el método del CIGB/EF
y de 5,55 % cuando se determinó por el método Ortho.
-
No se observó diferencia significativa cuando se compararon las
determinaciones realizadas por los 2 métodos ELISA entre sí
ni entre la prevalencia de los Acs anti-VHC en los donantes con TGP elevada
y normal estudiada por el método de la Ortho, pero se encontró
una diferencia significativa (p < 0,05) cuando se comparó la
prevalencia de estos Acs entre los donantes con TGP normal y eleva-da determinada
por la técnica del CIGB/EF (tabla).
TABLA. Comparación de la prevalencia de Acs anti-VHC
entre donantes de sangre con TGP < 20 u/L y TGP < 20 u/L determinada
por 2 métodos ELISA
|
Método
|
|
| |
CIGB/EF
|
ORTHO
|
|
| Donantes |
N
|
Acs
|
%
|
N
|
Acs
|
%
|
X2
|
| TGP < 20 u/L |
105
|
4
|
3,81
|
105
|
1
|
0,95
|
1,84*
|
| TGP < 20 u/L |
114
|
13
|
11,40
|
126
|
7
|
5,55
|
2,67*
|
X2 4,40** 3,63*
* No significativo.
** Significativo para p < 0,05.
DISCUSION
Los resultados de la seroprevalencia de Acs anti-VHC son similares a los
observados en otros estudios realizados en los 2 donantes de sangre cubanos.4
Ambos métodos: Ortho y CIGB/EF, se pueden utilizar indistintamente,
si bien este último mostró mayor sensibilidad en el estudio
comparativo entre los donantes con la TGP normal y elevada, tal vez debido
a los antígenos específicos que contiene.
La prevalencia de Acs anti-VHC, 7 a 10 veces mayor en los donantes con
TGP elevada comparados con aquéllos que presentan esta enzima normal,
es también similar a los datos comunicados por Lin et al.7
Sin embargo, otros autores han señalado que los donantes con estos
Acs, aunque se mantenían asintomáticos, presentaban aproximadamente
el 60 % de la TGP por encima de los límites normales, pero esencialmente
en los casos positivos para la RNA PCR (amplificación del RNA del
VHC) y además plantearon diferencias asociadas con los distintos
genotipos de este virus: aunque el tipo 2 podía causar una enfermedad
más intensa y con poca respuesta a la terapia con el interferón,
el tipo 3 fue el que presentó el porcentaje mayor de casos con TGP
elevada (83 %), lo que indicó que este serotipo está asociado
con un daño hepático mayor.6
Como existen diferencias poblacionales en la distribución de
los tipos de este virus, sería interesante determinar los más
frecuentes en nuestro medio, así como realizar algunas técnicas
confirmatorias, ya que esa tipificación es de importancia clínica
y evidentemente sólo en los casos positivos confirmados se elevan
los valores de TGP, lo cual está de acuerdo con nuestros resultados
(sólo el 11,40 % con la TGP aumentada en los donantes con Acs anti-VHC),
ya que con ambos métodos utilizados, se pueden observar con cierta
frecuencia falso positivos.
De lo expuesto se deduce que esta enzima es un marcador importante de
la hepatitis C y su determinación es muy conveniente cuando no se
dispone de ensayos confirmatorios.
Además, teniendo en cuenta los casos anteriormente mencionados,
en los que no es posible detectar los Acs anti-VHC así como la característica
de esta enfermedad de cursar durante cierto tiempo asintomática,
pero con la TGP alterada, se justifica aún más el estudio
de la TGP en el control habitual de la sangre posdonación.
AGRADECIMIENTOS
Se agradece al Lic. Guillermo Padrón, investigador
del Centro de Ingeniería Genética y Biotecnología,
la donación de los estuches CIGB/EF para la detección de
Acs anti-VHC, y la colaboración de las técnicas Irene Ramos
y Rosa Manes, del Banco Municipal 10 de Octubre.
SUMMARY
Serum glutamic-pyruvic transaminasa was studied in 3 744 blood
donors. In 0.93 of them values were found to be high. The prevalence of
antibodies to hepatitis C virus was compared in a group of donors presenting
with normal and increased transaminase values. Seroprevalence determinations
of antibodies were performed by two methods of immunoenzymatic assays:
1 from Ortho firm and the other from the "Finlay" Center of Genetic Engeneering
and Biotechnology, Cuba. No significant difference was found when comparing
both methods, except regarding prevalence of antibodies among donors presenting
with normal and increased transaminase levels, determined by the latter
method, with p 0.05. The usefulness of determining this enzyme in the usual
control of postdonation blood is pointed out.
Key words: ALANINE AMINOTRANSFERASE/blood; HEPATITIS ANTIBODIES/immunology;
HEPATITIS C VIRUSES/immunology; BLOOD DONORS; ENZYMELINKED IMMUNOSORBENT
ASSAY.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Caruso L, Trischitta C, Rusello M, Ardita G, Cristaldi
R, Tropeano L. Hepatitis C virus antibodies in different ages of life.
Arch Gerontol Geriatr 1991;2:511-4.
Rivero RA, Yamaguchi K, Góngora M, Hidalgo Gato
R, Almagro D, Hernández P, et al. Prevalencia de anticuerpos contra
el virus de la hepatitis C en pacientes cubanos. Rev Cubana Hematol Inmunol
Hemoter 1993;2:127-30.
Bradley DW, Beach MJ, Purdy MA. Recent developments in
the molecular cloning and characterization of hepatitis C and E viruses.
Microbiol Pathogen 1992;12:391-8.
Rivero RA, Yamaguchi K, Hidalgo Gato R, Martínez
M, Hernández P, Ballester JM. Detección de anticuerpos contra
el virus de la hepatitis C en donantes de sangre cubanos. Sangre 1992;4:301.
Hyland CA, Kearns S, Young IF, Battistuta D, Morgan CL.
Predictive markers for hepatitis C antibody ELISA specificity in Australian
blood donors. Transfus Med 1992;2:207-13.
McOmish F, Chan SW, Dow BC, Gillon J, Frame WD, Crawford
RJ, et al. Detección of three types of hepatitis C virus in blood
donors: Investigation of Type-Specific. Differences in serologic reactivity
and rate of alanine aminotransferase abnormalities. Transfusion 1993;33:7-13.
Lin CK, Chu R, Li KB, Leong S. A study of hepatitis C
virus antibodies and serum alanine amino transference in blood donors in
hong kong chinase. Vox Sang 1992;62:98-101.
Recibido: 5 de mayo de 1995. Aprobado: 10 de mayo de 1995.
Dra. Renée González Sampedro. Instituto
de Hematología e Inmunología. Apartado 8070, CP 10800, Ciudad
de La Habana 8, Cuba.