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Rev Cubana Oncol 1997;13(1):12-16
Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología

Disminución del cd6 en linfocitos periféricos y en ganglios linfáticos en pacientes con cáncer de mama

Dra. María del Carmen Arango Prado,1 Lic. Ana Rosa Ortíz Díaz,2 Dra. María Elena Faxas García,3 Dra. Heliana Valdés Canteras4 y Dr. Carlos García Santana5

RESUMEN

Se estudió la expresión de la molécula CD6 en células mononucleares periféricas y en ganglios linfáticos axilares de 30 pacientes con cáncer de mama, sin tratamiento oncoespecífico previo, mediante las técnicas de inmunofluorescencia indirecta e inmunohistoquímica respectivamente. Se utilizó el anticuerpo monoclonal (AcM) IOR-T1 (anti-CD6). Los resultados obtenidos en células mononucleares mostraron una disminución de la significación estadística (p < 0,01) de las células CD6+ de pacientes con relación a los controles, estas variaciones fueron más evidentes en estadíos avanzados. En el estudio de ganglios el resultado más relevante fue el aumento del por ciento de casos con baja expresión de células CD6+ y la correlación (p < 0,01) entre los niveles de células CD6+ en sangre periférica y ganglios.

Descriptores DeCS: NEOPLASMAS DE LA MAMA/ultraestructura; LINFOCITOS/patología. GANGLIOS/patología. GLUCOPROTEINAS/aislamiento y purificación. GLUCOPROTEINAS/deficiencia.

INTRODUCCIÓN

Muchos autores relacionan las alteraciones de la respuesta inmunitaria de las pacientes con cáncer de mama, con las modificaciones en la expresión de diferentes moléculas, expresadas en la superficie de linfocitos T de células mononucleares periféricas (CMP)1-4 y de ganglios linfáticos axilares (GLA).1,4,5

Investigaciones realizadas en el Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología (INOR) concluyeron que los pacientes con cáncer de mama en estadio II, con valores normales de linfocitos CD6+ previo al tratamiento, mostraron una sobrevida a 5 años significativamente superior, que aquellos con valores disminuidos de linfocitos CD6+.6

El CD6 es una glicoproteína que se expresa fundamentalmente en la superficie de timocitos y linfocitos T maduros.7 El AcM IOR-T1 generado y caracterizado en el INOR,8 reconoce un nuevo epítope de esta molécula. Se ha demostrado que la molécula CD6 está involucrada en los procesos de activación T, a través de las proteínas kinasas y con la inducción posterior de la síntesis de RNA mensajero para la IL-2; por lo que se le atribuye un importante rol como receptor fisiológico de la célula T para la potenciación de la respuesta inmu-nitaria.9,10

Con el fin de profundizar en los aspectos anteriormente expuestos, nos propusimos estudiar la expresión de la molécula CD6 en CMP y en el infiltrado linfoide de GLA en 30 pacientes con diagnóstico de cáncer de mama, vírgenes de tratamiento oncoespecífico.

MÉTODOS

Se incluyeron 30 pacientes que ingresaron en el Servicio de Mastología del INOR, con diagnóstico de cáncer de mama, y sin tratamiento oncoespecífico previo.

Se utilizaron como grupo control CMP obtenidas de 23 donantes voluntarios, aparentemente sanas, del sexo femenino, y los GLA empleados como controles fueron obtenidos de cadáveres femeninos víctimas de accidentes, gracias a la colaboración del Instituto de Medicina Legal.

Inmunofluorescencia indirecta (IFI)

Se realizó según la técnica de Rabelino11 con algunas modificaciones.12 Se utilizó el AcM IOR-T1 (anti-CD6) producido en el Centro de Inmunología Molecular (CIM).

Recogida y conservación de las muestras de Ganglios Axilares

Las muestras de GLA de las pacientes obtenidas en el acto quirúrgico, se congelaron en nitrógeno líquido, y posteriormente fueron cortadas por criostato y debidamente fijadas en láminas portaobjetos; igual proceder se empleó con los ganglios provenientes de los controles.

Inmunohistoquímica en cortes de tejidos

Se utilizaron los AcMs IOR-T11(anti-CD2) y el IOR-T1(anti-CD6) producidos por el CIM y el sistema de detección complejo avidiabiotina peroxidasa (ABC) (Vectastain. Laboratorios Vector), con el cromógeno diaminobencidina (Sigma).

Los cortes de ganglios patológicos y normales fueron observados al microscopio óptico; se determinó en cada ganglio el área timodependiente mediante el análisis del marcaje por el anticuerpo monoclonal IOR-T11 (anti-CD2) que reconoce a la mayoría de los linfocitos T presentes (PanT). Dicha área fue considerada como el 100 % del infiltrado T y tomada como referencia en este estudio fenotípico.

Se observó el área de positividad para el AcM IOR-T1; además se determinó el por ciento que ocupa dicha área marcada en relación con la zona T definida por AcM CD2 (100 %). Un sistema de códigos se elaboró y se definieron 2 grupos (tabla 1).

Grupo A: con alta proporción de células CD6 positivas, en relación con el área CD2 (códigos 3,4).

Grupo B: con baja proporción de células CD6 positivas con relación al área CD2 (códigos 0,1,2).

TABLA 1. Codificación de los resultados obtenidos por inmunohistoquímica
Grupo 
Código
Porciento del área CD 2 +
 
0
0 - 10 % del área CD 2 +
B
1 +
10 - 25 % del área CD 2 +
 
2 ++
25 - 50 % del área CD 2 +
A
3 +++
50 - 75 % del área CD 2 +
 
4 ++++
75 - 100 % deñ área CD 2 +
Los datos fueron procesados con el sistema Statgraphic, se aplicó la t de Student*, matriz de correlación de Spearman, prueba2 de independencia.

RESULTADOS

Resultados de estudio fenotípico en CMP

Se pudo comprobar diferencias estadísticamente significativas (p < 0,01), entre la media de los valores de pacientes al compararlo con la media de los valores de los controles (tabla 2). Encontramos que 13 casos del total estudiado mostraron valores bajos de células CD6+ (para el 43,4 % de las enfermas); en las 17 restantes (56,6 %) los valores de células CD6+ fueron normales.
TABLA 2. Expresión del CD6 en C.M.P. de pacientes con cáncer de mama
 
CD6
Pacientes 
_54,4
n = 30 DE
18,6
Controles 
_66,3
n = 23 DE
8,4
p < 0.01

Se estudió la expresión del CD6 en pacientes clasificados por criterios TNM pos-anatomopatológicos (pTNM)13; agrupándose las pacientes con estadios IIb y IIIa, por tener metástasis en ganglios axilares homolaterales móviles (N1) las pertenecientes a los estadios I y IIa ya que se corresponden con ausencia de ganglios metastásicos (N0) (figura).

Resultados de los estudios fenotípicos en GLA

De la totalidad de pacientes estudiadas, el 60 % (o sea, 18 pacientes) pertenecieron al grupo B, es decir tuvieron una baja expresión del CD6 en ganglios axilares; mientras que el 40 % restante (12 pacientes), mostraron una alta expresión de la molécula CD6 (grupo A).

Mediante la utilización de una matriz de correlación se comprobó la existencia de asociación estadísticamente significativa (p<0,01) entre la expresión del CD6 en CMP y GLA. De las 13 pacientes con niveles bajos de CD6 en CMP, el 84,6 % (11 casos) presentaron niveles bajos de CD6 por métodos IHQ (Biotina-Avidina).

Figura
FIGURA. Proporción de pacientes con CaMa con valores normales y disminuidos de CD6 en CMP según estadios.

DISCUSIÓN

Existen estudios anteriores de nuestro departamento en donde se ha evidenciado una disminución de la expresión de la molécula CD6 en CMP en pacientes con cáncer de mama.6 Nuestro trabajo se apoya una vez más en tales resultados.

Fue interesante encontrar que más de la mitad del total de las pacientes (60 %) tuvieron baja la expresión de células CD6+ en el infiltrado linfocitario de GLA, lo que sugiere que puede existir una relación entre la expresión de la molécula CD6 y la competencia inmunológica antitumoral de las células T en GLA, sitios donde se evidencian las complejas interracciones de la respuesta inmunitaria.

La correlación significativa entre los niveles de linfocitos CD6+ en CMP y en GLA, nos sugiere que la alteración sistémica se manifiesta de la misma manera in situ para este marcador en particular y por lo tanto, se puede extrapolar que la cuantificación de linfocitos CD6+ en sangre periférica se refleja de los niveles en GLA; ello simplifica la evaluación inmunitaria in situ de este marcador.

Al parecer la molécula reconocida por el AcM IOR-T1 (CD6) juega un papel importante en los mecanismos de la función de los linfocitos T9,14 y está adquiriendo cierto valor en la clínica, por lo que podría ser considerada como un marcador biológico de interés en la evolución y el pronóstico de estas pacientes. Las alteraciones en la expresión de este marcador, que está relacionado con procesos de activación de las células T, llevarían al individuo, más tarde o más temprano, a manifestar trastornos en su control de la respuesta inmunológica, bien porque anomalías genéticas sean capaces de activar mecanismos de malignización celular, o porque la expresión del CD6 esté relacionada con los mecanismos necesarios para la vigilancia inmunológica; estudios futuros serán necesarios para aclarar tales interrogantes.

SUMMARY

The expression of the CD6 molecule in peripheral mononuclear cells and axillary lymph nodes of 30 patients presenting with breast cancer without previous oncospecific treatment was studied by indirect immu-nofluorescence and immunohistochemistry, respectively. The monoclonal antibody (AcMO IOR-CD6) was used for the study. Results obtained in mononuclear cells showed a statistically significant reduction (P 0.01) of CD6+ cells in patients related to controls. These variations were more evident in advanced stages. In the study of the lymph nodes, the most significant result was an increase of the percentage of cases presenting with a low expression of CD6+ cells and the correlation (P 0.01) between levels of CD6+ cells in peripheral blood and lymph nodes.

Subject headings: BREAST NEOPLASMS/ultrastructure. LYMPHOCYTES/pathology. GANGLION/pathology. GLYCOPROTEINS/isolation & purification. GLYCOPROTEINS/deficiency.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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  14. Swack JA. Biosynthesis and post-translational modification of CD-6 a T cell signal transducing molecule. J Biol Chem 1991;266(11):7137-43.
Recibido: 21 de mayo de 1996. Aprobado: 23 de mayo de 1996.

Dra. María del Carmen Arango Prado. Instituto de Oncología y Radiobiología. Calle 29 esq E, Vedado, Ciudad de La Habana.

1 Especialista de I Grado en Inmunología. Aspirante a Investigador. Grupo de Inmunología Clínica del INOR.
2 Licenciada en Bioquímica. Investigador Auxiliar. Grupo de Inmunohistoquímica del INOR.
3 Especialista de I Grado en Inmunología. Investigador Auxiliar. Grupo de Inmunología Clínica del INOR.
4 Especialista de I Grado en Inmunología. Hospital Ginecoobstétrico "América Arias".
5 Doctor en Ciencias Médicas. Grupo de Inmunología Clínica del INOR.

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